طراحی روش real-time nasbaجهت شناسایی و سنجش بقاء انگل توکسوپلاسما گوندی در توکسوپلاسموزیس تجربی در رت و مقایسه آن با روش real-time rt-pcr قبل و بعد از درمان با اسپیرامایسین.

به دلیل عوارض غیر قابل جبران توکسوپلاسموزیس در افراد دچار نقص سیستم ایمنی و نوزادان متولد شده از مادران آلوده، نیاز مبرم به تکنیک های سریع، حساس و دقیق برای شناسایی توکسوپلاسما گوندی احساس می شود. روش های مولکولی به عنوان روش های حساس تر و اختصاصی-تر از رو ش های سرولوژیک در تشخیص توکسوپلاسموزیس مطرح هستند. در این مطالعه، استفاده از روش real-time nasba برای سنجش کمی بار انگلی در خون ر ت های آلوده شده با توکسوپلاسما گوندی قبل و بعد از درمان با اسپیرامایسین مورد ارزیابی قرار گرفتnasba. یک روش تکثیر rna در شرایط هم دما می باشد و روش های آشکارسازی rna وقت گیر و خطرزا هستند. این اشکالات می تواند بوسیله تکنیک real-time nasba برطرف شود. برای این منظور از molecular beacon برای آشکارسازی rna انگل توکسوپلاسما گوندی استفاده شد. molecular beacon یک توالی اولیگونوکلئوتیدی تک رشته است که دارای ساختار حلقه و لوپ است. توالی لوپ مکمل توالی هدف می باشد و توالی ساقه که در دو انتهای لوپ می باشد مکمل هم می باشد. یک ماده فلورفور در یک انتهای ساقه و در سر دیگر یک ماده خاموشگر وجود دارد. وقتی molecular beacon در محلول بصورت آزاد وجود دارد قسمت ساقه به لوپ اتصال دارد و فلورسانس از ماده فلورفور به ماده خاموشگر منتفل می شود که آن را به صورت انرژی آزاد می کند. وقتی توالی لوپ مکمل خود را پیدا کند ماده فلورفور از ماده خاموشگر جدا شده و طی تغییرات فضایی که در ماده فلورفور ایجاد می شود دیگر ماده خاموشگر نمی تواند آن را خاموش کند و ماده فلورفور انرژیی را که باعث برانگیختگی اش شده، در طول موج بالاتر رها می کند. پروب های دارای ساختار لوپ و حلقه در مقایسه با پروب های خطی از اختصاصیت پایین تری برخوردار هستند که این موضوع را به عدم وجود ساقه در این پروب ها نسبت می دهند. در این تحقیق پرایمرهای اختصاصی که دارای توالی t7 پروموتر هستند برای هدف گیری ژن b1 مربوط به تاکی زوئیت به طول قطعه bp 116 انتخاب شده و برای تکثیر rna توکسوپلاسما گوندی، از فرایند nasba و ردیابی همزمان محصول با molecular beacon استفاده گردید. real-time nasba یک روش اختصاصی همراه با حساسیت بالا می باشد. بدون شک روش حاضر یک روش سریع و حساس برای ردیابی انگل زنده و مطالعه اثربخشی داروها و واکسن ها می باشد.